FRET ratioの計算方法-04

 

実際の反応スキーム

各チャンネルの蛍光強度の比を,FRET ratio(Observed) ,とすると,クロストーク成分がなければ,

\(\Large FRET_{ ratio } (Observed) = \displaystyle \frac{ YFP \ channel}{CFP \ channel} \)

となりますが,クロストーク成分を考えると,反応に基づいたCFPとYFPの蛍光の比は,

\(\Large FRET_{ ratio } = \displaystyle \frac{ YFP \ channel - 0.34 \times CFP \ channel}{CFP \ channel}\)

\(\Large \hspace{70pt} = \displaystyle \frac{ YFP \ channel}{CFP \ channel} - CT \)

となることがわかります.

 

反応スキーム

CheA, CheY, CheB, Motor, Receptor,更にはリン酸化の反応を考えてみると,結構複雑であることがわかります.

ここで,
 A : CheA
 Y : CheY
 B : CheB
 Z : CheZ
 M : Motor
 Re : Receptor
 p : リン酸化
となります.

こんがらがっっているので,整理すると,

となります.赤文字が今回のFRET計測で関わるところです.

さらに,Victor, Lipkowらのデータを考慮して,赤線だけの4状態に簡略化してみました

それが,Fig.7-A,にある,

となります.

この各状態を,FRETratio,から推定すればいいことになります.

 

 

次はこの4状態反応スキームと,FRETratioとの関係,について検証してきましょう.

 

 

l tr