ミカエリスメンテン-非競争阻害-04
次に,以下の反応スキームのように阻害剤が酵素[E],および複合体[ES]に影響を与える場合にどうなるかを考えていきましょう.
\( \Large \hspace{15 pt} \ce{E <=>C[S][]ES ->C[] E + P} \)
\( \Large I \downarrow \uparrow \hspace{25 pt} \uparrow \downarrow I \)
\( \Large \hspace{10 pt} \ce{EI <=>C[S][] ESI} \)
この場合を非競争阻害,と呼びます.
解離定数を定義します.
\( \Large K_m \equiv \frac{[E][S]}{[ES]} = \frac{[EI][S]}{[ESI]} \)
\( \Large K_I \equiv \frac{[E][I]}{[EI]} = \frac{[ES][I]}{[ESI]}\)
として,書き直すと,
\( \Large [E] = \frac{K_m}{[S]} \cdot [ES] \)
\( \Large \begin{eqnarray} [EI] &=& \frac{[I]}{K_I} \cdot [E] \\
&=&
\frac{[I]}{K_I} \cdot \frac{K_m}{[S]} \cdot [ES] \\
\end{eqnarray} \)
\( \Large [ESI] = \frac{[I]}{K_I} \cdot [ES] \)
酵素の保存則,
\( \Large [E_T] = [E] + [ES] + [EI] + [ESI] \)
を使うと,
\( \Large \begin{eqnarray} [E_T] &=& \frac{K_m}{[S]} \cdot [ES] + [ES] + \frac{[I]}{K_I} \cdot \frac{K_m}{[S]} \cdot [ES] + \frac{[I]}{K_I} \cdot [ES]\\
&=& [ES] \cdot \left( 1 +
\frac{K_m}{[S]} + \frac{[I]}{K_I} \cdot \frac{K_m}{[S]} + \frac{[I]}{K_I} \right) \\
&=& [ES] \cdot \left( \frac{K_I \cdot [S] +K_I \cdot K_m + K_m \cdot [I] + [S][I]}{K_I \cdot [S]} \right) \\
\end{eqnarray} \)
\( \Large [ES] = [E_T] \frac{K_I \cdot [S]}{K_I \cdot [S] +K_I \cdot K_m + K_m \cdot [I] + [S][I]} \)
\( \Large V_P= k_{+2}\cdot [E_T] \frac{K_I \cdot [S]}{K_I \cdot [S] +K_I \cdot K_m + K_m \cdot [I]+ [S][I]} \)
\( \Large V_P= V_{max}\frac{K_I \cdot [S]}{K_I \cdot [S] +K_I \cdot K_m + K_m \cdot [I]+ [S][I]} \)
となります.
逆数を取ると,
\( \Large \begin{eqnarray} \frac{1}{V_P}&=& \frac{1}{V_{max}} \frac{K_I \cdot [S] +K_I \cdot K_m + K_m \cdot [I]+ [S][I]}{K_I \cdot [S]} \\
&=&
\frac{1}{V_{max}} \left( 1 + \frac{[I]}{K_I} \right)+ \frac{K_m}{V_{max}}\frac{K_I + [I]}{K_I } \frac{1}{[S]} \\
&=&
\frac{1}{V_{max}}\left( 1 + \frac{[I]}{K_I} \right) + \frac{K_m}{V_{max}} \left( 1+ \frac{ [I]}{K_I } \right) \frac{1}{[S]} \\
\end{eqnarray} \)
となります.阻害剤がないときと比べると,
\( \Large \frac{1}{V_P} = \frac{1}{V_{max}} + \frac{K_m }{V_{max}} \frac{1}{ [S]} \)
となり,Y切片が変化し,
\( \Large \frac{1}{V_{max}} \Longrightarrow \frac{1}{V_{max}}\left( 1 + \frac{[I]}{K_I} \right) \)
とVmax値が大きくなっていることがわかります.
X切片は,
\( \Large 0= \frac{1}{V_{max}}\left( 1 + \frac{[I]}{K_I} \right) + \frac{K_m}{V_{max}} \left( 1+ \frac{ [I]}{K_I } \right) \frac{1}{[S]} \)
\( \Large 0= 1 + K_m \frac{1}{[S]} \)
\( \Large \frac{1}{[S]}= -\frac{1}{ K_m} \)
となり,阻害剤なしの場合と変わらないことがわかります.
グラフで表すと,Km値(X切片)は変わらず,Vmax値(Y切片)は変化するので,
となります.両逆数プロットを取ることで,阻害剤の効果が明らかになるなんて面白いですね.